在进行实验的过程中，病毒能高效感染“难转”细胞，并可把基因长期留在细胞内甚至整合进基因组，因此当质粒转不动或需要持久、体内表达时，就可以改用病毒，常见的病毒载体包括腺病毒，慢病毒，腺相关病毒。 1 慢病毒，腺病毒，腺相关病毒的区别 1. 慢病毒载体（克隆容量不超过4kb） 慢病毒属于逆转录病毒，遗传物质是 RNA ；是基于人类免疫缺陷病毒（HIV）等慢病毒改造的基因递送工具，能够将外源基因高效整合到宿主细胞的基因组中，实现长期稳定的基因表达。 慢病毒是一种逆转录病毒，需要将其 RNA 基因组转化为 DNA 才能整合到宿主基因组。因此在感染细胞后，其RNA在逆转录酶的作用下形成DNA，逆转录完成后，病毒双链 DNA 会在整合酶的作用下整合到宿主细胞的染色体DNA上。 因此 慢病毒能够整合到基因组中 慢病毒基因组进入细胞后，在细胞浆中反转录为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白或产生小RNA。 2. 腺病毒（克隆容量高达5.5kb） 腺病毒载体是一种基于腺病毒改造的、用于递送外源基因的工具，是一种DNA病毒，腺病毒载体的基因组以游离形式存在于宿主细胞的细胞质中，不会插入到宿主染色体 DNA 上，不整合到宿主细胞基因组。在细胞分裂过程中，这些外源的DNA不会被平均分配到子代中，所以会逐渐被稀释，因此，只能进行瞬时表达。 腺病毒通过Fibre蛋白识别CAR受体、Penton基底结合整合素αVβ3/αVβ5触发内吞，经酸化内吞体逃逸后沿微管移至核孔，将病毒DNA释入细胞核，启动感染。

3. 腺相关病毒（克隆容量不超过3kb） 腺相关病毒（AAV）载体是一种基于腺相关病毒改造的基因递送工具，属于小型单链 DNA 病毒载体。其核心特点是基因组通常以游离体形式（ episome ）存在于宿主细胞核内，多数情况下不整合到宿主细胞染色体 DNA 中 AAV病毒载体可以用于侵染细胞，侵染细胞时，AAV与细胞表面特异性受体结合，激活胞内信号通路，进而触发AAV通过受体介导的内吞作用进入细胞，在核内体、高尔基体等细胞器的协助下进入细胞核，随后病毒裂解，其单链DNA需复制成为双链DNA后表达目的基因。 2 慢病毒，腺病毒，腺相关病毒的优势 ① 表达时间长：慢病毒可将外源基因整合到宿主细胞基因组上，实现基因长时间稳定的表达，不随细胞分裂传代而丢失，是细胞实验的首选，常用于构建稳定株。 ② 免疫原性低：直接注射活体组织不易造成免疫反应，适用于动物实验。 ① 表达快，腺病毒感染细胞后，1-2天即可表达 ② 载体容量大，感染效率高，常用于感染难感染的细胞 ②宿主细胞范围广：AAV具有广泛的宿主范围，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。 ③扩散能力强：AAV直径约20-26nm，体积小，滴度高，具有良好的扩散能。 ④体内表达基因时间长：AAV具有保持长期基因转录表达能力，体内表达一般3周可以达到高峰，随后持续高表达，作用时间＞5个月。